Микроскопическое исследование спермы

Используется световая и люминисцентная микроскопия.

Световая микроскопия эякулята позволяет определить концентрацию спермы в 1мл, подвижность спермиев, морфографию эякулята.

Метод люминесцентной микроскопии эякулята (метод прижизненный) позволяет изучить морфологические особенности спермиев, их жизнеспособность, клетки сперматогенеза, состояние ядерного хроматина, его гетерогенность, оценить структурное состояние ДНК и др.

При экскреторно-токсическом бесплодии жизнеспособность спермиев по сравнению с контрольным снижена на 82,5%; при сочетанном на 67,6%; при секреторном на 50,2%.

1. Количество спермиев.

• Нижняя граница нормы 60-50 млн в 1 мл эякулята
• Верхняя граница нормы 200 млн в 1 мл эякулята
• Средняя граница нормы-80-100 млн в 1 мл эякулята

При олигозооспермии I степени способность к оплодотворению снижена.

При олигозооспермии II степени - значительно снижена.

При полизооспермии - оплодотворяющая способность низкая.

Азооспермия характерна для секреторного бесплодия.

Аспермия наблюдается при экскреторном бесплодии на почве обтурации семявыносящих протоков при нормальной или несколько сниженной генеративной функции яичек. Однако может наблюдаться и при полном отсутствии сперматогенного эпителия. Дифференциальный диагноз между обтурационной и тестикуляр-ной аспермией проводят с помощью гормональных исследований крови и биопсии яичек (см.выше).

По данным Всемирной Организации здравоохранения (ВОЗ) сперма считается фертильной, если нижняя граница концентрации спермиев в 1мл. эякулята не менее 20 млн, но при условии наличия активно подвижных сперматозоидов не менее 70% и не более 30% патологически измененных форм.

2. Подвижность спермиев.

Следует помнить, что подвижность спермиев, скорость передвижения и направленность миграции - разные критерии и подлежат раздельным оценкам.

Предложены автоматизированные и объективные методики оценки подвижности спермиев:

• множественная фохографическая экспозиция
• использование лазерного луча
• трехцветная фотография
• скоростная микросъемка
• спектрофотометрия
• лазерное сканирование
• таймерное фотографирование
• компьютерный анализ

Изучают также морфометрию головок спермиев, что позволяет судить об их структурной патологической перестройке.

При хроническом простатите, орхоэпидидимите, осложненных бесплодием, отмечено уменьшение головки спермиев по сравнению с нормой.

Различают следующие виды движения спермиев в эякуляте:

а) прямолинейное поступательное движение со спиральным вращением вокруг своей оси; характерно для нормальных, здоровых спермиев.

б) манежное движение (круговое прогрессивное). Спермин вращаются вокруг своей головки или по небольшому кругу.

в) колебательное, местное движение, имеется движение хвоста, но не происходит перемещения спермиев.

При нормоспермии: 75%-80% подвижных форм и не более 30% неподвижных.

Подвижность оценивается:

В норме подвижность 70% - 80% спермиев должна соответствовать оценкам 3 и 4.

Вероятность оплодотворения снижается с уменьшением количества хорошо подвижных спермиев в эякуляте. Наличие слизи в эякуляте затрудняет движение спермиев.

Чем продолжительнее жизнь спермиев (в норме 18-20 час), тем выше их способность к оплодотворению.

Для установления продолжительности движения спермиев и определения индекса их выживаемости подсчитывают количество подвижных спермиев через 3, 6 и 24 часа.

При нормальном сперматогенезе через 3 часа число двигающихся спермиев уменьшается на 7%, через 6 часов на 15%, через 24 часа только 10% спермиев продолжают двигаться у каждого второго мужчины.

Чем глубже поражение сперматогенеза, тем меньше длительность движения спермиев.

3. Агглютинация спермиев (до биопсии)

В норме спермин имеют отрицательный электрический заряд, благодаря чему не происходит столкновения и слипания спермиев в густом эякуляте.

Сдвиг рН в кислую сторону снижает электрический заряд спермиев и вызывает их агглютинацию. Агглютинация спермиев может быть признаком аутоиммунных реакций в организме больного.

Различают следующие степени агглютинации :

Слабая (+) - (единичные спермин склеены)

Средняя (2+) - склеены около 50% спермий лишь головками

Сильная (3+) - 50% спермий склеены головками и хвостами

Массовая (4+) - склеены почти все спермий

Агглютинация спермиев наблюдается при:

а) воспалительных заболеваниях половой сферы с изменением рН, накоплением молочной кислоты

б) аутоиммунизации организма антигенами тестикулярного происхождения ( в норме менее 10% ).

4. Морфография эякулята.

Состоит из сперматограммы и цитограммы.

При нормозооспермии в эякуляте находят 5-24% (в среднем 9%) морфологически измененных спермиев.

В цитограмме указывают наличие клеточных и неклеточных элементов.

Клеточные элементы:

Сперматогонии

Сперматоциты

Сперматиды

Спермиофаги - гигантские клетки - обнаруживают в эякуляте с большим количеством клеток сперматогенеза. Спермиофаги - появляются при длительном половом воздержании или обтурации се-мявыносящих путей.

Клетки сперматогенеза (сперматоциты, сперматиды, сперматогонии, клетки Сертоли) при нормозооспермии составляют до 10 %.

При патологических состояниях они вовсе отсутствуют или количество их резко возрастает.

Юных форм должно быть не более 2%, старых - до 4%.

Лейкоциты - в нормальной сперме единичные лейкоциты 1-10 млн в 1 мл эякулята ( в среднем: 3,5 + 0,5 х 10 в 1 мл). Повышенное количество лейкоцитов наблюдается при воспалительных процессах придаточных половых желез.

Эпителиальные клетки - в норме находят небольшое количество клеток призматического эпителия уретры. При уретритах обнаруживают клетки многослойного эпителия из ладьевидной ямки. При отсутствии обтурации семявыносящих протоков в эякулят могут попадать единичные полигональной формы клетки эпителия придатка яичка, реже появляются эпителиальные клетки Сертоли.

Эритроциты - в норме не определяются. Появляется при воспалительных процессах в придаточных половых железах.

Неклеточные элементы:

Липоидные тельца - мелкие, блестящие зерна - продукт секреции простаты. В нормальном эякуляте их много и они придают ему опалесцирующий вид. При хронических простатитах их количество уменьшено.

Семенные кристаллы Бетхера - бесцветные, удлиненной или звёздчатой формы. Образуются в охлажденной сперме из спермина и фосфата. При аспермии количество их увеличивается.

Амилоидные тельца - овальной формы со слоистым строением. В норме не встречаются. Появляются при застое в простате.

5. Выявление антисперматозоидных антител (АСАТ). Антигены содержаться в спермиях и семенной жидкости.

Существуют антитела:

Сперматоагглютинирующие

Сперматоиммобилизирующие

Сперматотоксические ( разрушающие сперматогенную ткань)

6. Определение резистентности спермиев.

а) Определение устойчивости спермиев по отношению ко времени путем установления продолжительности движения спермиев через 3,6,24 часа.

б) Определение резистентности спермиев по отношению к растворам с различными рН (щелочи и кислоты), а также к 1% раствору натрия хлорида. Сперму разводят в 500, 1000, 2000, 4000, 6000, 8000 и т.д.раз.

После каждого разведения исследуют подвижность спермиев. Их устойчивость выражается степенью разбавления 1% раствором ЫаС1, при котором прекращаются движения спермиев. Резистентность спермиев в норме равна 8000-14000 (в среднем 12000)

Понижение резистентности спермиев указывает на неполную зрелость спермиев, которую может обусловить дисфункция придатка яичка на почве патологических изменений в нем.

В норме по мере прохождения через придаток яичка резистентность спермиев обычно увеличивается за счет их созревания.

в) метод определения резистентности спермиев с использованием 1% фтористого № - это метод определения общей подвижности гамет в эякуляте.

7. Оценка дыхательной способности спермиев

Интенсивность дыхания спермиев определяют по времени обесцвечивания метиленового синего, которое наступает по исчерпании в сперме всего растворенного кислорода. При нормозооспер-мии интенсивное дыхание протекает в течении 23 - 75 мин (в среднем - 47 мин).

8. Для определения резервных функциональных способностей спермиев используют:

а) время обесцвечивания метиленового синего

б) снижение подвижности спермиев через 3, 6, 12 сек. после эякуляции.